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武漢德晟生化科技有限公司  

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首頁 > 供應產品 > Tris緩沖液在蛋白質電泳和核酸瓊脂糖電泳中的應用
Tris緩沖液在蛋白質電泳和核酸瓊脂糖電泳中的應用
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發貨 湖北鄂州市付款后3天內
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品牌 德晟
過期 長期有效
更新 2021-08-09 14:19
 
詳細信息

Tris緩沖液是蛋白質電泳和蛋白質印跡的組成部分。大多數SDS-PAGE凝膠、電泳緩沖液和印跡緩沖液都用Tris緩沖。

Tris緩沖液在蛋白質電泳中的應用

大多數SDS凝膠使用不連續的Tris緩沖系統。濃縮凝膠具有大孔,因此較大的肽可以輕松遷移通過,通常在pH6.76.8下配制。在此pH值下,離子化的氯離子會迅速遷移,從而提高它們后面的pH值并產生一個具有低電導率區域的電壓梯度,這會導致甘氨酸(來自運行緩沖液)電離并遷移到氯離子前沿后面。樣品中的大多數肽由于結合了SDS而帶負電荷,在氯化物和甘氨酸之間遷移,形成窄帶,從而“堆積”。一旦堆棧到達分離凝膠,其處于較高的pH值(通常為pH8.7-8.8),甘氨酸的電離增加會使其加速并超過肽段。此外,較小孔徑的分離膠開始產生篩分效果,導致肽段按大小分離。

大多數蛋白質印跡實驗方案使用低離子強度的Tris緩沖液進行蛋白質轉移。轉移時間取決于印跡裝置的類型和感興趣的肽大小范圍。

Tris緩沖液在核酸瓊脂糖電泳中的應用

Tris緩沖液廣泛用于DNA瓊脂糖電泳。兩種主要緩沖液是TBETris硼酸鹽/EDTA)和TAETris醋酸鹽/EDTA)。盡管不同形式的DNA的分辨率及其在電泳過程中的遷移率存在一些差異,但這些Tris緩沖液通常可以互換使用。TBE中的硼酸鹽離子會抑制許多酶,因此如果在電泳后不進行某種類型的DNA純化,一些酶介導的下游操作可能不起作用。

制作Tris緩沖液

Tris緩沖液是大多數生物系統的不錯選擇,因為它在25°C時的pKa值約為8.1,使其成為pH7-9范圍內的有效緩沖液。該pH值范圍適用于大多數生物過程。Tris粉末也比更專業的緩沖液(如HEPES)更便宜且更耐用。

有兩種方法可以制備Tris緩沖溶液。一種是制備所需濃度的Tris堿和Tris-HCl溶液,然后將一種溶液(通常為Tris-HCl)的等分試樣添加到另一種(通常為Tris堿)溶液中,同時監測pH值直至獲得正確的pH值。在實踐中,很少這樣做。

制作大多數常用Tris緩沖液的常用方法是僅從Tris堿基開始。將適量的Tris粉末溶于水中,用HCl調節pH值,然后將緩沖液配制成所需體積。假設在調節pH值時沒有過沖,該方法不會改變離子強度。但是,在過沖并用NaOH重新調整后,或使用Tris-HCl并用NaOH調整pH值后,離子強度會發生變化。根據Tris緩沖區的預期用途,此類更改可能重要也可能不重要。

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